Abstract
<jats:p>Введение. Для выявления антител к вирусу гепатита Е (ВГЕ) наиболее предпочтительным является метод иммуноферментного анализа (ИФА) с количественной оценкой результатов. Данный подход, основанный на строгих критериях, обеспечивает прецизионное определение концентрации антител, что позволяет проводить достоверную диагностику и эпидемиологический мониторинг. Цель исследования. Разработка тест-системы для определения концентрации IgG-антител к ВГЕ в сыворотке крови человека методом непрямого ИФА и оценка ее диагностической эффективности. Материалы и методы. Наборы реагентов «ДС-ИФА-АНТИ-HEV-G» (ООО «НПО Диагностические системы», Россия) и recomWeel HEV IgG (Euroimmun, Германия). Международный стандартный образец ВОЗ Anti-Hepatitis E Serum, Human code: 95/584 (NIBSC, Англия). Иммунореагенты, полученные в ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова: рекомбинантный антиген ORF2/3-ВГЕ1/3, моноклональные антитела к IgG человека («Сорбент», Россия), конъюгированные с пероксидазой хрена, специфические поликлональные антитела кролика к белку ORF2/3-ВГЕ1/3, конъюгированные с IgG человека. Сыворотки крови здоровых людей и лиц, инфицированных вирусами гепатитов А, В, С, Е, ВИЧ и герпесвирусами. Результаты и обсуждение. Разработана иммуноферментная тест-система «Скрин-ВГЕ-IgG» для определения концентрации IgG к вирусу гепатита Е (МЕ/мл) в сыворотке крови человека в непрямом формате. Синтезирован и стандартизирован по международному ВОЗ-стандарту Anti-Hepatitis E Serum, Human, NIBSC code: 95/584, искусственный калибратор для определения концентрации АТ-ВГЕ. Определены основные функциональные характеристики «Скрин-ВГЕ-IgG» в соответст- вии с требованиями ГОСТ 51352-2013. Тест-система апробирована на образцах сывороток крови больных гепатитом Е (n = 75) и условно здоровых лиц (n = 320). По данным ROC-анализа, диагностическая чувствительность тест-системы составляет 98,7 %, диагностическая спе- цифичность — 99,9 %. Показано отсутствие перекрестной реактивности «Скрин-ВГЕ-IgG» на образцах с серологическими маркерами других вирусных гепатитов и патологии печени иной этиологии (n = 83). Сравнительные испытания тест-системы «Скрин-ВГЕ-IgG» и ее коммерческого аналога – набора реагентов recomWeel HEV IgG, — показали более высокую диагностическую чувствительность разработан- ной тест-системы. Заключение. Разработанная тест-система обладает высокими показателями диагностической эффективности и может быть рекомендована к применению в клинической практике для определения концентрации IgG-антител к ВГЕ.</jats:p> <jats:p>Introduction. To detect antibodies to the hepatitis E virus (HEV), the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is the preferred method with a quantitative assessment of results. This method, based on strict criteria, al- lows for the precise determination of the quantity of antibodies, enabling reliable diagnosis and epidemiological monitoring. The aim. To develop a test system for measuring the concentration of IgG antibodies against HEV in human serum using indirect ELISA, and to evaluate its diagnostic accuracy. Materials and methods. Reagents kits «DS-ELISA-ANTI-HEV-G» (Diagnostic Systems, Russia) and «recomWeel HEV IgG» (Euroimmun, Germany) were used, as well as WHO International Standard Samples of Anti- Hepatitis E Serum (NIBSC, England) and immunoreagents from the «I.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera»: recombinant antigen ORF2/3-HEV1/3, monoclonal antibodies to human IgG conjugated with horseradish peroxidase (Sorbent, Russia), and specific polyclonal rabbit antibodies for the protein ORF2/3-HEVI/3 conjugated with human IgG. Blood serum samples from healthy individuals and those infected with hepatitis A, B, C, E, HIV and herpes viruses. Results and discussion. It has been developed of enzyme immunoassay kit reagents called «Screen-HEV-IgG» to determine the concentration of hepatitis E virus IgG (AT-HEV) in human blood serum. The kit uses an indirect ELISA method to measure the concentration of AT-HEV in IU/ml. An artificial calibrator has been synthesized and standardized based on the World Health Organization's international standard «Anti-Hepatitis E Serum, Human», NIBSC code 95/584, to determine the AT-HEV concentration. The main functional characteristics of «Screen-HEV-IgG» were determined according to GOST 51352-2013 requirements. The kit was tested on blood serum samples from patients with hepatitis E (n=75) and healthy individuals (n=320). According to ROC analysis, the diagnostic sensitivity of the kit is 98.7%, and the diagnostic specificity is 99.9%. There was no cross-reactivity observed with samples containing serological markers for other viral hepatitis or liver pathology of different etiologies (n=83). Comparative tests of the «Screen-HEV-IgG» and its commercial counterpart, «recomWeel HEV IgG», demonstrated a higher level of diagnostic accuracy for the developed reagent kit. Conclusion. The developed test system has a high diagnostic accuracy and can be recommended for clinical use to determine the concentration of IgG antibodies to HЕV.</jats:p> <jats:p>Киришүү. Е гепатит вирусуна (ЕГВ) каршы келген антителаны аныктоо үчүн түпкү натыйжаларына сандык жана сапаттык баа берилген иммуноферменттик анализа (ИФА) методу бир топ натыйжалуу болуп эсептелет. Так критерийлерге негизделген бул ыкма антителалардын концентрациясына бир топ так аныктама берүүнү камсыздайт жана ал гепатит оорусуна туура диагностика, жугуштуу оорулардын түрлөрүнө эпидемиологиялык мониторинг жүргүзүүгө мүмкүнчүлүк түзөт. Изилдөөнүн максаты. Адамдын канынын сыворткасындагы Е гепатит вирусуна каршы келген IgG-антителанын концентрациясын кыйыр түрдөгү ИФА методунун жардамы менен аныктоо үчүн тест-системаны иштеп чыгуу жана анын натыйжалуулугуна баа берүү. Изилдөөнүн материалдары жана методдору. «ДС-ИФА-АНТИ-HEVG» (ООО «НПО Диагностикалык системалар», Россия) жана recom Weel HEV IgG (Euroimmun, Германия) реагенттерин жыйноо. Anti-Hepatitis E Serum, Human codeлер сыяктуу ВОЗдун эл аралык стандарттарынын үлгүлөрү: 95/584 (NIBSC, Англия); И.И.Мечников атындагы ФГБНУ НИИВСте алынган төмөнкүдөй иммунореагенттер: рекомбинанттык (искусстволук жол менен алынган же генетикалык жактан өзгөртүлгөн материал же белок) антиген ORF2/3-ЕГВ1/3; адамдын IgGга карата моноклоналдык (иммундук системанын белоктору) антителалары («Сорбент», Россия); конъюгироваланган (бири-бири менен байланышкан) хрендин пероксидазосу (калкан бездеринин гормондорунун синтези үчүн зарыл болгон каражат); Коендордун ORF2/3ЕГВ1/3 белогуна болгон поликлоналдык антителалары; адамдардын бири-бири менен байланышкан IgGлары. А, В, С, Е, ВИЧ гепатит вирустарын жана герпесвирустарды жуктарган ден соолугу сак адамдардын кандарынын сывороткилери. Изилдөөнүн натыйжалары жана алардын талкууга алынуусу. Адамдын канынын сыворткасындагы Е (МЕ/мл) гепатит вирусунун IgG концентрациясын аныктоо үчүн иммуноферменттик «Скрин-ЕГВ-IgG» тест-системасы иштелип чыкты. Алардын баары Anti-Hepatitis E Serum, Human, NIBSC code эл аралык ВОЗ_стандарты – АТ-ЕГВ концентрациясын аныктоо максатында 95/584 жасалма калибратордун (текшерүү, түздөө багытындагы жабдуу) жардамы менен синтезделип чыкты жана стандартташтырылды. Скрин-ЕГВ-IgGнын» негизги функ ционалдык өзгөчөлүктөрү ГОСТ 51352-2013түн талаптарына ылайык аныкталды. Тест-система шарттуу түрдө сак-саламат деп эсептелинген (n = 320) жана гепатит оорулуулардын Е (n = 75) кандарынын сыворткаларынын үлгүлөрүндө апробацияланды. ROC-анализдин маалыматтары боюнча тест-системанын диагностикалык сезгичтиги 98,7 %ды, диагностикалык спецификалуулугу — 99,9 %ды түздү. Башка гепатит вирустарынын серологиялык маркерлери жана боордун (n = 83) этиологиясынын (оорунун пайда болуу себептерин жана учурдагы абалын изилдөөчү медицинанын бөлүмү) патологиясы менен «Скрин-ЕГВIgG» үлгүлөрүнун каршылаш келген рективдүүлүгүнүн жок экендиги көрүндү. «Скрин-ЕГВ-IgG» тест-системасынын жана анын коммерциялык аналогу – recomWeel HEV IgG реагенттеринин топтомунун сыноого алынуусу биз иштеп чыккан тест-системанын диагностикалык жактан жогорку сезгичтигин далилдеди. Корутунду. Биз иштеп чыккан тест-система жогорку диагностикалык натыйжалуулукка ээ жана ЕГВге каршы IgG антителанын концентрациясын аныктоо үчүн клиникалык практикада колдонууга сунушталат.</jats:p>