Abstract
<jats:p>Нами выявлен бактериальный штамм Exiguobacterium mexicanum 6, который является продуцентом новой эндонуклеазы рестрикции, названной EmiI. Фермент EmiI узнает шестинуклеотидную непалиндромную последовательность ДНК 5’-CTCTTC-3’ и расщепляет ее в стороне от сайта узнавания в позициях 1/4: 5’-CTCTTC(N)1↓-3’/3’-GAGAAG(N)4↓-5’ с образованием 5’-выступающих трехнуклеотидных концов. Таким образом, EmiI является изошизомером рестриктаз Ksp632I [1] и Bst6I [2]. Штамм-продуцент идентифицировали по морфологическим и биохимическим признакам, а также по анализу первичной структуры фрагмента гена 16S рРНК. Препарат эндонуклеазы рестрикции EmiI с концентрацией 5000 е.а./мл был получен путем очистки в три хроматографические стадии. Оптимальными условиями работы фермента являются SE-буфер Y (33 мМ Трис-ацетат (pH 7,9), 10 мМ Mg-ацетат, 66 мМ K-ацетат, 1 мМ ДТТ) и температура 37°С.</jats:p> <jats:p>A bacterial strain, Exiguobacterium mexicanum 6, was identified as a producer of a novel restriction endonuclease designated EmiI. The enzyme recognizes the non-palindromic hexanucleotide DNA sequence 5′-CTCTTC-3′ and cleaves DNA outside the recognition site at positions 1/4, generating three-nucleotide 5′-protruding ends: 5′-CTCTTC(N)₁↓-3′ / 3′-GAGAAG(N)₄↓-5′. Thus, EmiI is an isoschizomer of the restriction endonucleases Ksp632I [1] and Bst6I [2]. The producer strain was identified based on morphological and biochemical characteristics as well as analysis of the primary structure of a fragment of the 16S rRNA gene. A preparation of restriction endonuclease EmiI with an activity of 5000 U/ml was obtained through purification using three chromatographic steps. Optimal reaction conditions for EmiI include SE buffer Y (33 mM Tris–acetate, pH 7.9; 10 mM Mg–acetate; 66 mM potassium acetate; 1 mM DTT) at a temperature of 37 °C.</jats:p>