Новая сайт-специфическая 5mC-зависимая ДНК-эндонуклеаза MoxI эффективно гидролизует ДНК последовательность 5’-R(5mC)GY-3’

<jats:p>Обнаружен штамм бактерии Microbacterium oxydans являющийся продуцентом 5-метилцитозин-зависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы MoxI, которая узнает и расщепляет в ДНК последовательность 5’-R(5mC)↓GY-3’/3’YG↓(5mC)R-5’. Ген moxI клонирован в составе вектора E.coli, получен препарат рекомбинантного фермента и изучены его свойства. Показано, что сайт узнавания ДНК-эндонуклеазы MoxI совпадает с сайтом узнавания 5mC-зависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы GlaI. Однако новый фермент, в отличие от GlaI, проявляет максимальную активность при 37°С и с большей эффективностью расщепляет последовательность узнавания с двумя 5-метилцитозинами.</jats:p> <jats:p>A bacterial strain of Microbacterium oxydans was identified as a producer of a 5-methylcytosine-dependent, site-specific DNA endonuclease, MoxI. The enzyme recognizes and cleaves the DNA sequence 5′-R(5mC)↓GY-3′ / 3′-YG↓(5mC)R-5′. The moxI gene was cloned and expressed in Escherichia coli, and the recombinant enzyme was purified and biochemically characterized. The recognition sequence of MoxI was shown to be identical to that of the previously described 5mC-directed site-specific DNA endonuclease GlaI. In contrast to GlaI, however, MoxI exhibits maximal catalytic activity at 37 °C and demonstrates higher cleavage efficiency toward substrates containing two 5-methylcytosine residues within the recognition site.</jats:p>