Abstract
<jats:p>Нами обнаружен бактериальный штамм Peribacillus species 31, который является продуцентом новой эндонуклеазы рестрикции, названной Pse31I. Фермент узнает шестинуклеотидную непалиндромную последовательность ДНК 5’-GGTCTC-3’и расщепляет ее в стороне от сайта узнавания в позициях 1/5: 5’-GGTCTC(N)1^/3’-CCAGAG(N)5^-5’. Таким образом, Pse31I является истинным изошизомером рестриктазы Eco31I [1]. Штамм-продуцент идентифицировали по морфологическим и биохимическим признакам, а также по анализу первичной структуры фрагмента гена 16S рРНК. Pse31I имеет максимальную активность при 37°С и инактивируется инкубацией при 55 и 65°С. Фермент не расщепляет сайты с метилированным цитозином в верхней цепи (5’-GGTCT(5mC)-3’) и/или в нижней цепи (3’-(5mС)CAGAG). Оптимальными условиями работы фермента являются SE-буфер 5 (Y) (33 мМ Трис-ацетат (pH 7,9), 10 мМ Mg-ацетат, 66 мМ K-ацетат, 1 мМ ДТТ) и температура 37°С</jats:p> <jats:p>We have identified a bacterial strain, Peribacillus species 31, which produces a novel restriction endonuclease named Pse31I. The enzyme recognizes the non-palindromic hexanucleotide DNA sequence 5’-GGTCTC-3’ and cleaves outside the recognition site at positions 1/5: 5’-GGTCTC(N)1^ / 3’-CCAGAG(N)5^ Thus, Pse31I is a true isoschizomer of the restriction enzyme Eco31I [1]. The producer strain was identified based on morphological and biochemical characteristics, as well as analysis of the primary structure of a 16S rRNA gene fragment. Pse31I exhibits maximum activity at 37°C and is inactivated by incubation at 55°C and 65°C. The enzyme does not cleave DNA sites containing methylated cytosine in the top strand (5’-GGTCT(5mC)-3’) and/or in the bottom strand (3’-(5mC)CAGAG). The optimal reaction conditions for the enzyme are SE-buffer 5 (Y) (33 mM Tris-acetate (pH 7.9), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 1 mM DTT) at 37°C.</jats:p>